一种筛选高表达FAD-GDH重组毕赤酵母菌株的方法
基本信息
| 申请号 | CN202111133183.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN113717872A | 公开（公告）日 | 2021-11-30 |
| 申请公布号 | CN113717872A | 申请公布日 | 2021-11-30 |
| 分类号 | C12N1/19;C12N15/53;C12N15/81;C12N15/66;C12Q1/32;C12Q1/04;G01N21/31;C12R1/84 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 董聪;王玥;高庆华;罗同阳;王庆庆;刘攀 | 申请（专利权）人 | 河北省微生物研究所有限公司 |
| 代理机构 | 北京贵都专利代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 李新锋 |
| 地址 | 071000 河北省保定市竞秀区五四中路2089号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提供了一种筛选高表达FAD‑GDH的重组毕赤酵母菌株的方法。包括如下步骤：通过依次使用Zeocin、G418及G418浓度梯度筛选，以增加重组菌中FAD‑GDH基因拷贝数。首先，利用前期获得的密码子偏好性优化的FAD‑GDH基因片段分别与表达载体pPICZαA、pMD连接，构建重组表达载体pPICZαA‑GDH和pMD‑GDH；然后，将pPICZαA‑GDH电转入毕赤酵母X33构建重组子，使用Zeocin及试管发酵筛选获得毕赤酵母重组菌株X33‑GDH‑2，将其制成感受态；最后将pMD‑GDH电转入X33‑GDH‑2感受态细胞，利用G418浓度梯度平板和试管发酵进行筛选。结果表明，转入pMD‑GDH后100μg/mlG418平板上的转化子X33‑GDH‑2‑1酶活比X33‑GDH‑2提高94％；2000μg/mlG418梯度平板上菌株X33‑GDH‑2‑17酶活最高，比X33‑GDH‑2‑1提高97％。结果表明了依次使用不同筛选标记及浓度梯度策略有助于提高FAD‑GDH的表达量。 |
