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一种快速筛选sgRNA的基因敲除试剂盒及方法

基本信息

申请号	CN201710019880.0	申请日	-
公开（公告）号	CN106591366A	公开（公告）日	2017-04-26
申请公布号	CN106591366A	申请公布日	2017-04-26
分类号	C12N15/85(2006.01)I;C12N15/867(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	卿志荣;郑帮;郭帅;修朝阳	申请（专利权）人	上海睿玻生物科技有限公司
代理机构	-	代理人	-
地址	200233 上海市徐汇区桂平路333号4号楼408室
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种快速筛选sgRNA的基因敲除试剂盒及方法。其中试剂盒包括：盒体、试剂A、试剂B。该试剂盒利用含有萤火虫萤光素酶全长编码序列与绿色荧光蛋白C端融合获得的pCAG‑mCherry‑Luc质粒，并将靶向基因组序列插入绿色荧光蛋白起始密码子前，最终将该质粒与sgRNA以及CRISPR‑Cas9的表达质粒共同转染HEK293FT细胞，通过观察红色荧光蛋白亮度和荧光素酶活力检测从而快速的定性或定量测定sgRNA介导基因组修饰活性，并采用该领域常规方法验证sgRNA筛选系统在慢病毒系统中的有效性。本发明的优点在于可以简单、快速构建任何靶基因的模拟基因组，并且更快速、简便评价sgRNA活性且精确定量其sgRNA活性。