一种高通量筛选核酸酶的方法
基本信息
| 申请号 | CN202111180434.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN114134130A | 公开（公告）日 | 2022-03-04 |
| 申请公布号 | CN114134130A | 申请公布日 | 2022-03-04 |
| 分类号 | C12N9/22（2006.01）I;C12N15/55（2006.01）I;C12N15/81（2006.01）I;C12N1/19（2006.01）I;G01N21/64（2006.01）I;C12Q1/34（2006.01）I;C12R1/865（2006.01）N | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 魏炜;隽叶雯;李季;赵劲 | 申请（专利权）人 | 江苏南创化学与生命健康研究院有限公司 |
| 代理机构 | 南京常青藤知识产权代理有限公司 | 代理人 | 金迪 |
| 地址 | 210036江苏省南京市栖霞区仙林大道163号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种高通量筛选核酸酶的方法，包括如下步骤：随机突变核酸酶基因，并构建线性核酸酶突变文库；制成核酸酶文库突变酵母细胞；将Azide‑NHS标记到突变酵母细胞表面后与DBCO‑引物共孵育；带有引物的突变酵母细胞于诱导培养基中培养，再与底物共孵育；将洗涤后的酵母细胞与探针共孵育，反应后检测所得酵母细胞的荧光强度，筛选出目标核酸酶。本发明基于核酸酶突变体文库中的酿酒酵母细胞来筛选高活性核酸酶，筛选步骤简单，偶联了DNA产物的长度与酵母表面核酸酶的酶活，在反应原位检测荧光强度，更加快速且高效，实现利用FACS的酶活高通量筛选，对核酸酶的定向进化具有深远意义。 |
