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一种羊肚菌原生质体的高效制备方法

基本信息

申请号	CN201610165040.0	申请日	-
公开（公告）号	CN105647820A	公开（公告）日	2016-06-08
申请公布号	CN105647820A	申请公布日	2016-06-08
分类号	C12N1/14(2006.01)I;C12R1/645(2006.01)N	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	谭俊呈;黄建星;兰健勇;陈振坤;易弋	申请（专利权）人	广西生众生物科技开发有限公司
代理机构	柳州市荣久专利商标事务所（普通合伙）	代理人	广西生众生物科技开发有限公司
地址	545006 广西壮族自治区柳州市高新一路15号信息产业园A栋A4-14号
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种食用菌原生质体的高效制备方法，包括以下步骤：⑴收集新鲜羊肚菌孢子后置于液体培养基中培养，液体培养基是在常规PD培养基的基础上添加CuCl₂；⑵培养4-6天后，离心收集菌体，再使用PBS缓冲液重悬菌体；⑶将重悬后的菌体与石英砂混合后，振荡；⑷将震荡后的菌体过滤2次；⑸收集过滤液离心处理，菌体用PBS缓冲液洗涤2次后，再重悬于PBS缓冲液中；⑹向重悬液中添加溶壁酶、蜗牛酶，30℃处理1-3h；⑺将酶处理后的细胞于离心处理，沉淀经ZnCl₂溶液洗涤后，重悬于ZnCl₂溶液中，获得羊肚菌原生质体溶液。该方法通过先制备单细胞悬液，然后酶解制备原生质体，在此过程中通过添加金属离子控制菌丝生长和稳定原生质体，有效的提高了原生质体的制备效率。