一种具有高效同源定向修复活性Cas9-RNAiRNP的制备方法及应用
基本信息
| 申请号 | CN202210216005.2 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN114672504A | 公开（公告）日 | 2022-06-28 |
| 申请公布号 | CN114672504A | 申请公布日 | 2022-06-28 |
| 分类号 | C12N15/70（2006.01）I;C12N15/55（2006.01）I;C12N15/113（2010.01）I;C12N9/22（2006.01）I;C12N15/88（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 刘奕;孙文丽;吴克;殷文浩;乔洁 | 申请（专利权）人 | 武汉博沃生物科技有限公司 |
| 代理机构 | 湖南乔熹知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | - |
| 地址 | 430075湖北省武汉市东湖高新区高新大道858号生物医药产业园中小企业园A9-2栋 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种具有高效同源定向修复活性Cas9‑RNAi RNP的制备方法，其中，选择对NHEJ途径的关键蛋白Ligase 4进行短暂抑制，通过延长Cas9RNP的gRNA的3′端以构建shRNA的类似结构，利用大肠杆菌细胞“一步法”表达Cas9RNP技术，得到携带特定sgRNA‑shRNA的Cas‑RNAi RNP。本发明的Cas‑RNAi RNP实现了基因编辑与RNA干扰的功能联用，设计针对Ligase 4基因的shRNA碱基序列，以期对NHEJ途径进行暂时抑制，从而实现高效的HDR修复。 |
