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一种使用IMAC层析纯化非标签化CRM197蛋白的方法

基本信息

申请号 CN202110624063.4 申请日 -
公开（公告）号 CN113402592A 公开（公告）日 2021-09-17
申请公布号 CN113402592A 申请公布日 2021-09-17
分类号 C07K14/34（2006.01）I;C07K1/22（2006.01）I 分类 有机化学〔2〕;
发明人 魏鑫;侯文礼;黄杰;孙俊;陈邱;李松;赖艺;薛冰;冯晓 申请（专利权）人 成都康华生物制品股份有限公司
代理机构 成都东唐智宏专利代理事务所（普通合伙） 代理人 罗言刚
地址 610000四川省成都市经济技术开发区北京路182号
法律状态 -

摘要

摘要 本发明公开了一种使用IMAC层析纯化非标签化CRM197蛋白的方法，包括如下步骤：（1）将大肠杆菌表达系统得到非标签化的CRM197蛋白包涵体用变性剂处理，（2）过滤后上样IMAC层析柱，使用洗脱液洗脱，收集洗脱峰，（3）用复性液复性及超滤浓缩，（4）然后进行分子筛层析或疏水层析，获得CRM197蛋白。本发明不需要添加His标签，只需要对蛋白进行变性处理，从而打开蛋白结构使蛋白结构内部的His暴露出来，从而增加与金属离子的结合能力，然后根据适当的洗脱步骤将目的蛋白与杂质分离，该技术方案特别适用于包涵体的纯化，一步层析就能得到纯度大于90%的样品。