一种不依赖于纯化对PCR扩增产物直接进行Sanger测序的方法

基本信息

申请号 CN202011557959.7 申请日 -
公开(公告)号 CN112575071A 公开(公告)日 2021-03-30
申请公布号 CN112575071A 申请公布日 2021-03-30
分类号 C12Q1/6869;C12N15/11 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
发明人 刘金超;刘明坤;叶锋 申请(专利权)人 北京思尔成生物技术有限公司
代理机构 北京纪凯知识产权代理有限公司 代理人 魏少伟
地址 100176 北京市大兴区经济技术开发区经海四路156号院11号楼4层401室
法律状态 -

摘要

摘要 本发明公开了一种不依赖于纯化对PCR扩增产物直接进行Sanger测序的方法。本发明公开的方法包括:1)利用5’端带有测序引物的引物对对待测DNA片段进行PCR扩增,得到扩增产物;2)在含有测序引物与扩增产物的测序反应体系中进行测序反应,得到测序产物;测序引物的3’端带有不能被核酸外切酶进行切割的修饰;3)分析测序产物,得到待测DNA片段的序列,完成测序。本发明通过设计经特殊修饰的测序引物,可以不经过纯化,直接对PCR扩增产物进行下游测序反应和测序分析,从而精简了测序流程,缩短了测序时间,降低了操作的复杂程度,同时不需要纯化试剂,降低了检测成本,更有利于Sanger测序法在临床样本检测中的应用。