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用于筛选治疗器官纤维化的胶原转录抑制剂的高通量筛选方法

基本信息

申请号	CN202011638647.9	申请日	-
公开（公告）号	CN112813132A	公开（公告）日	2021-05-18
申请公布号	CN112813132A	申请公布日	2021-05-18
分类号	C12Q1/02;G01N21/64	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	王阳;柏旭	申请（专利权）人	厦门市博瑞来医药科技有限公司
代理机构	合肥市上嘉专利代理事务所（普通合伙）	代理人	李璐
地址	361026 福建省厦门市海沧区翁角西路2036号厦门生物医药产业园A19号楼第4层
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种用于筛选治疗器官纤维化的胶原转录抑制剂的高通量筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：克隆人Col1A1、Col1A2、Col3A1启动子‑2000‑100区域，单独或联合插入pGL3‑basic报告基因载体，经转化DH5α菌和质粒提取得到用于转染的质粒；将得到的质粒分别与内参pRL‑TK质粒转染成纤维细胞，后加入TGF‑β1激活；或同时加入TGFβR抑制剂；激活后按照荧光素酶报告基因检测试剂盒进行处理，酶标仪读取化学发光数据，得出对TGF‑β1诱导的胶原合成敏感的质粒，以上结果证实了该种筛选方法的实用性。还公开了利用该方法在测定抑制I/III型胶原转录药物的药效定量分析中的应用。