一种U6、miR 92a及miR 21的三重RT‑qPCR检测方法及试剂盒

基本信息

申请号 CN201710321897.1 申请日 -
公开(公告)号 CN107012241A 公开(公告)日 2017-08-04
申请公布号 CN107012241A 申请公布日 2017-08-04
分类号 C12Q1/68(2006.01)I 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
发明人 张新;彭春梅;张晓玮;邓可基;乐小炎;张嘉;李家导;陈观芝;林敏深;林若琳;石壮壮;罗园香;莫静嫣;李海茵;王星;王法;吴彩虹 申请(专利权)人 东莞微量精准检测研究院有限公司
代理机构 北京精金石专利代理事务所(普通合伙) 代理人 广州海力特生物科技有限公司;东莞微量精准检测研究院有限公司
地址 510535 广东省广州市黄埔区科学城开源大道11号A7栋二层
法律状态 -

摘要

摘要 本发明属于生物检测领域,具体涉及U6、miR 92a及miR 21三种miRNA进行单管三重逆转录的检测方法及逆转录后分别进行单管双重定量的检测方法及试剂盒。本发明提供的试剂盒包括逆转录茎环引物组、定量检测引物组和定量检测探针组、酶系和PCR反应试剂,使得U6、miR 92a及miR 21的逆转录可在同一反应管中进行,同时,高灵敏和高特异性的定量检测引物序列和定量检测探针及与之相匹配的PCR反应程序和条件,使得miR 21和U6、miR 92a和U6可单管双重定量,避免了现有技术中单管单重定量时的操作误差,使定量更简洁准确。另外,本发明引入Stoffel片段和Tfl DNA聚合酶的双聚合酶扩增方法,提高检测特异性的同时,可耐受更多的模版,检测灵敏度及结果稳定性提高。