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一种构建小鼠TCRalphaCDR3区文库的方法

基本信息

申请号	CN201710984518.7	申请日	-
公开（公告）号	CN107829145A	公开（公告）日	2018-03-23
申请公布号	CN107829145A	申请公布日	2018-03-23
分类号	C40B50/06	分类	组合技术〔8〕;
发明人	于海礼;吴海阳;袁江北;仇鑫;谭颖	申请（专利权）人	重庆天科雅生物科技有限公司
代理机构	重庆上义众和专利代理事务所（普通合伙）	代理人	重庆天科雅生物科技有限公司
地址	400084 重庆市大渡口区春晖路街道翠柏路101号5幢1001-1004
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种构建小鼠TCR alpha CDR3区测序文库的方法，主要步骤包括：(1)提取鼠组织或全血总RNA。(2)逆转录RNA为cDNA，将接头序列连接到长链cDNA末端，通过通用C端引物和接头序列引物扩增包含CDR3区的TCR alpha。(3)通过Tn5转座酶打断TCR alpha并富集CDR3区序列。(4)通过illumina高通量测序平台进行测序。本方法适用于含有各类T细胞的组织，体液等样本的建库；采用5’RACE技术，可高效的无偏差的对小鼠TCR alpha进行扩增，克服了多重PCR扩增所引起的模板拷贝数和扩增效率难以控制，产物发生偏移等问题；利用Tn5酶能将DNA打断和接头连接同步完成的功能和使用特异性的引物可对TCR alpha的高度可变区(CDR3区)进行快速准确的富集建库，使测序更有针对性，方便数据分析，节约测序成本。