一种利用大肠杆菌发酵制备小干扰RNA分子的方法
基本信息
| 申请号 | CN03129043.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN1458279A | 公开（公告）日 | 2003-11-26 |
| 申请公布号 | CN1458279A | 申请公布日 | 2003-11-26 |
| 分类号 | C12P19/34;C12N15/70 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 钱志康;宣宝琴;李琳;徐剑锋;谭畅;闵太善;王维荣;谢承光;沈水源;程小伟;史顺成;黄伟达 | 申请（专利权）人 | 上海恒达科技发展股份有限公司 |
| 代理机构 | 上海正旦专利代理有限公司 | 代理人 | 复旦大学;上海复旦新杨生物科技有限责任公司;上海恒达科技发展股份有限公司 |
| 地址 | 200433上海市邯郸路220号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及一种利用大肠杆菌发酵大规模制备RNA干扰用小干扰RNA分子的新方法。本发明构建了长双链RNA表达载体，并转化大肠杆菌宿主菌，通过大规模发酵，用碱－SDS法抽提发酵菌体得到全RNA和质粒DNA的混合物。该混合物用CF－11柱进行纯化得到长双链RNA。最后利用大肠杆菌III型RNA酶将长双链RNA切成12－30bp的小干扰RNA。得到的siRNA用分光光度法检测其纯度与浓度，OD260/OD280＝1.978，表明样品的纯度相当高。每100g大肠杆菌菌体得到siRNA样品约为210mg。 |
