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一种单细胞RNA逆转录与文库构建的方法

基本信息

申请号	CN201810019044.7	申请日	-
公开（公告）号	CN108103055A	公开（公告）日	2018-06-01
申请公布号	CN108103055A	申请公布日	2018-06-01
分类号	C12N15/10;C12Q1/6806;C12Q1/6869;C40B50/06	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	胡春旭;陆思嘉;任军	申请（专利权）人	上海亿康医学检验所有限公司
代理机构	北京品源专利代理有限公司	代理人	上海亿康医学检验所有限公司
地址	201400 上海市奉贤区望园路1698弄26号17幢
法律状态	-

摘要

本发明属于转录组分析领域，涉及到一种快速进行单细胞RNA逆转录与文库构建的方法。本发明能在5‑6小时内,由1‑2000个细胞或10pg‑20ng经提取的真核生物总RNA为起始，扩增出20‑500ng高质量全长双链cDNA，并获得符合下游分析要求的高质量cDNA文库。此发明有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和基因组DNA的污染，表达定量分子标签可辅助基因表达量计算，同时在完整扩增RNA序列信息的同时该表达定量分子标签还可保留链来源信息。本发明可获得95％以上的逆转录与扩增建库成功率，cDNA文库可无缝衔接Illumina主流测序平台，下机数据(5M Reads)可检测到90％以上的基因表达，基因表达一致性超过90％，扩增无明显偏倚，且需要的样本投入量更少。