一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法
基本信息
| 申请号 | CN201710253825.8 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN106906237A | 公开（公告）日 | 2017-06-30 |
| 申请公布号 | CN106906237A | 申请公布日 | 2017-06-30 |
| 分类号 | C12N15/70;C12N9/12 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 李京;高嵩;陈祉月;罗志丹;龚雪梅;张惠铭;张羽;潘绮雯 | 申请（专利权）人 | 江苏愚公生命科技有限公司 |
| 代理机构 | 连云港润知专利代理事务所 | 代理人 | 淮海工学院;江苏愚公生命科技有限公司 |
| 地址 | 222000 江苏省连云港市海州区通灌南路108号淮海工学院海洋药物研究院高嵩转 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明是一种高性能M‑MLV逆转录酶的制备方法，包括突变体克隆构建，所构建的突变体质粒序列均经过测序确认，得到17个突变体质粒；然后进行突变体的筛选：将野生型pET28b‑M‑MLV和17个突变体质粒转化进入大肠杆菌感受态细胞中，培养、诱导突变酶表达；收集菌体获得突变酶粗提液；选择有蛋白表达的突变酶粗提液，在不同温度下进行逆转录活性筛选：将活性筛选结果阳性的突变体在液体培养基中培养、诱导蛋白表达；收集菌体纯化得到M‑MLV逆转录酶。本发明方法采用分子理性设计与功能筛选相结合，在较小范围内筛选即获得高热稳定性M‑MLV逆转录酶，其热稳定性达到耐热能力65°C。 |
