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一种快速测定DNA聚合酶活性的方法

基本信息

申请号	CN202011002396.5	申请日	-
公开（公告）号	CN112176040A	公开（公告）日	2021-01-05
申请公布号	CN112176040A	申请公布日	2021-01-05
分类号	C12Q1/686(2018.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	卢辰;罗志丹;陈晓雨;张坤晓;许恒皓;唐雨婷;陈佳玥	申请（专利权）人	江苏愚公生命科技有限公司
代理机构	北京和联顺知识产权代理有限公司	代理人	赵宇
地址	222000江苏省连云港市海州区苍梧路59号
法律状态	-

摘要

本发明公开一种快速测定DNA聚合酶活性的方法，包括：(1)绘制标准曲线并计算线性回归方程：将两种寡核苷酸探针H1和H2以不同比例混合，测量荧光值并绘制标准曲线，计算线性回归方程；(2)恒温条件下进行DNA聚合酶活性检测反应：以步骤(1)中仅含H1的工作溶液为底物，加入dNTP混合液和镁离子，使用该DNA聚合酶对应的反应缓冲液，配制DNA聚合酶活性检测反应体系；(3)中止反应后测定产物荧光值：恒温反应后强行中止反应，降温到室温后测定产物含量，记录30min下的荧光增加值；(4)计算酶活性：将荧光增加值代入步骤(1)中得到的标准曲线对应的线性回归方程，得出体系中产物的含量，计算原酶液活性。不依赖同位素，操作简单，准确度和重复性好。