用于表达限制性内切酶SacI的甲基化保护菌株的筛选方法
基本信息
| 申请号 | CN201710764317.6 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN107557372A | 公开（公告）日 | 2018-01-09 |
| 申请公布号 | CN107557372A | 申请公布日 | 2018-01-09 |
| 分类号 | C12N15/54(2006.01)I;C12N15/74(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 张坤晓;龚雪梅;韩挺翰;许恒皓 | 申请（专利权）人 | 江苏愚公生命科技有限公司 |
| 代理机构 | 连云港润知专利代理事务所 | 代理人 | 江苏愚公生命科技有限公司 |
| 地址 | 222000 江苏省连云港市海州区花果山大道17-1-1005至1006 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明是一种用于表达限制性内切酶SacI的甲基化保护菌株的筛选方法，它通过甲基转移酶M.AluI的重组表达菌株的建立、限制酶SacI的重组表达等步骤，将测序正确的重组表达质粒pBAD‑R.SacI转化感受态细胞进行筛选培养，获得限制酶SacI的重组表达菌株；该菌株经扩大培养后，以阿拉伯糖诱导，获得限制酶SacI的重组蛋白。本发明方法实现了限制酶SacI的高效重组表达；利用阿拉伯糖操纵子表达系统对本底表达的严苛控制进行限制酶SacI的重组表达；抵抗限制酶SacI对宿主基因组DNA的酶切，方法稳定且高效；筛选出的M.AluI甲基化保护菌株同样可应用于其他具有类似识别位点的限制酶的重组表达。 |
