基于piggyBAC系统构建基因过表达或干扰稳转细胞株的方法
基本信息
| 申请号 | CN201811619985.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN109628488A | 公开（公告）日 | 2019-04-16 |
| 申请公布号 | CN109628488A | 申请公布日 | 2019-04-16 |
| 分类号 | C12N15/85（2006.01）I; C12N15/65（2006.01）I; C12N5/10（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 郑敦武; 段伟婷; 程冬洋 | 申请（专利权）人 | 赛业模式生物研究中心（太仓）有限公司 |
| 代理机构 | 苏州创元专利商标事务所有限公司 | 代理人 | 赛业（苏州）生物科技有限公司; 赛业模式生物研究中心（太仓）有限公司 |
| 地址 | 215400 江苏省苏州市太仓市城厢镇人民南路162号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了基于piggyBAC系统构建基因过表达或干扰稳转细胞株的方法，包括如下步骤:将基因过表达或干扰元件片段、荧光标记片段及抗性筛选片段依次插入到piggyBAC载体的ITR片段之间，构建载体，然后将构建的载体和pBase表达质粒共转染细胞，进行抗性筛选，选取抗性存活细胞，进行Q‑PCR检测，将pBase‑MU质粒转入阳性克隆中，在突变型pBase的作用下将ITR之间序列整体切除，原位点不残余任何序列，确认切除成功后，对阳性克隆进行冻存。本发明的方法将基因过表达或干扰元件插入ITR之间，构建piggyBAC稳转载体。没有基因大小的限制，可以对较大的基因或多个基因同时进行过表达操作。 |
