一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法
基本信息
| 申请号 | CN202110002459.5 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN112662739A | 公开（公告）日 | 2021-04-16 |
| 申请公布号 | CN112662739A | 申请公布日 | 2021-04-16 |
| 分类号 | C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 许明炎;张晓妮;李慧;林郁松 | 申请（专利权）人 | 深圳海普洛斯医学检验实验室 |
| 代理机构 | 北京高沃律师事务所 | 代理人 | 薛红凡 |
| 地址 | 518000 广东省深圳市南山区西丽街道松坪山路1号源兴科技大厦南座1106 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提供了一种用于NGS平台的尿液外泌体RNA提取和文库构建方法，属于医学和生物技术领域。通过添加助沉试剂到尿液中实现外泌体有效沉降，解决RNA材料受限的问题，同时采用Trizol试剂直接对外泌体进行RNA提取且去除回溶、纯化步骤，减少RNA在提取中损失和降解，为后续建库提供合格原料。通过修复cDNA损伤，优化末端修复加A、纯化步骤，以及文库扩增反应循环数，使用高保真酶预混液进行PCR扩增进行建库，该文库保存了外泌体分子多样性，为NGS技术在液体活检和诊断的应用提供可靠样本。该方法有效解决了尿液样本外泌体含量低，提取RNA总量低，无法有效建库，利用NGS平台测序的难题。 |
