先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法

基本信息

申请号	CN201811586556.8	申请日	-
公开（公告）号	CN109652446A	公开（公告）日	2019-04-19
申请公布号	CN109652446A	申请公布日	2019-04-19
分类号	C12N15/84（2006.01）I; C12N15/65（2006.01）I; C12N15/11（2006.01）I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	米铁柱; 张国栋; 刘佳音; 邹丹丹; 徐春莹; 罗碧; 刘洋	申请（专利权）人	青岛袁策集团有限公司
代理机构	北京华仁联合知识产权代理有限公司	代理人	青岛袁策集团有限公司
地址	266000 山东省青岛市李沧区金水路171号青岛国际院士港16号楼
法律状态	-

摘要

本申请公开了一种先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法，包括以下步骤：A、提取待转化作物DNA；B、分别获得多种连锁基因表达盒；C、获取去除Hpt基因的pCAMBIA1300质粒的；D、各个表达盒的连接；E、融合片段与pCAMBIA1300‑hpt‑质粒的连接。进一步包括：构建双T‑DNA载体，其中一个T‑DNA区含有三连锁基因，另一个T‑DNA区含有抗性基因，用于愈伤转化及植株再生阶段的筛选；所述三连锁基因分别为：DsRed基因、EAT1基因、ZmAA基因。本发明提供了一种基于DsRED荧光蛋白基因为报告基因的不含潮霉素抗性基因的工程菌株。本发明还提供了一种将片段进行融合，然后转化载体的一种实验新思路。