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一种牙源性干细胞的培养与外泌体分离方法

基本信息

申请号	CN202011371809.7	申请日	-
公开（公告）号	CN112458045A	公开（公告）日	2021-03-09
申请公布号	CN112458045A	申请公布日	2021-03-09
分类号	C12N5/0775(2010.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	于金华;闫朝婷;周洲;吴锦涛;景双林;闫明;李泽汉	申请（专利权）人	江苏省盐业集团有限责任公司
代理机构	南京天华专利代理有限责任公司	代理人	瞿网兰
地址	210029江苏省南京市汉中路136号
法律状态	-

摘要

一种牙源性干细胞的培养与外泌体分离方法，其特征是包括以下步骤：1）配置外泌体分离用的培养基并在4℃以下保存；2）取传代至3‑7代的DPSC为实验对象开始进行实验；3）经过24小时培养，收集细胞上清，为最大程度回收，用1‑2ml无菌PBS洗培养皿两遍，PBS冲洗液+细胞上清作为分离外泌体的对象；4）上一步骤收集的液体在4℃温度下差速离心去除细胞碎片及死细胞，若液体量少冻至‑80℃冰箱待液体充足后进行下一步；5）用规格为0.22µm的滤器去除较大的细胞外囊泡及其他杂质；6）用规格为100KDa超滤管，在4℃，4000*g,30min条件下进行超滤，去除较小的杂质并浓缩得到浓缩液；7）将浓缩液加入外泌体提取得到外泌体。本发明方法简单，成本低，效果好。