CL7蛋白质、高活性重组TET酶CL7-NgTET1、其原核表达载体及应用
基本信息
| 申请号 | CN202111476804.5 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN114107252A | 公开（公告）日 | 2022-03-01 |
| 申请公布号 | CN114107252A | 申请公布日 | 2022-03-01 |
| 分类号 | C12N9/22（2006.01）I;C12N9/02（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12Q1/25（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 宋东亮;韦磊;邬升杨;李婕;刘倩;曹振;江翱;黄开瑜 | 申请（专利权）人 | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 代理机构 | 苏州根号专利代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 朱华庆 |
| 地址 | 200120上海市浦东新区天雄路166弄1号楼402室 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提供一种屏蔽核酸酶活性的CL7蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。还公开了一种高活性重组TET酶CL7‑NgTET1，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，及其原核表达载体，其结构为：pET28A‑N6H‑MBP‑CL7‑NgTET1，还公开了其在酶转化法检测DNA甲基化中的应用。本发明在NgTET1基础上进行了设计和改造，通过融合CL7 domain获得了CL7‑NgTET1重组融合蛋白。该重组融合蛋白能够显著提高TET蛋白对5mC的氧化能力，提高了该酶的体外生物活力。通过在载体N端引入MBP融合蛋白，可在原核系统中表达，从而极大提高可溶蛋白的产量，从而同时解决了TET酶产量低和酶活低的问题，也极大缩短了生产周期及降低成本。 |
