一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞
基本信息
| 申请号 | CN201310126017.7 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN103215295B | 公开（公告）日 | 2015-04-22 |
| 申请公布号 | CN103215295B | 申请公布日 | 2015-04-22 |
| 分类号 | C12N15/63(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;A01K67/027(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 张涌;刘旭;王勇胜;郭文江;权富生 | 申请（专利权）人 | 杨凌科元克隆股份有限公司 |
| 代理机构 | 西安通大专利代理有限责任公司 | 代理人 | 汪人和 |
| 地址 | 712100 陕西省西安市杨凌区邰诚路3号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种β-酪蛋白位点定点整合Lys基因的打靶载体及其构建的细胞，包括目的基因Lys，在的基因Lys的上游和下游分别设有5’同源臂和3’同源臂，以牛β-酪蛋白位点第二内含子锌指核酸酶识别位点的上下游各延伸700～850bp的同源序列作为5’同源臂和3’同源臂。本发明使用电穿孔的方法将打靶载体pCSN2-Lys-Neo-EGFP和锌指核酸酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，经过G418药物筛选和PCR分析后获得了打靶的阳性克隆细胞，以打靶的阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎，为研制抗乳房炎的转基因奶牛提供坚实的基础。 |
