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基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法

基本信息

申请号	CN201410442470.3	申请日	-
公开（公告）号	CN104263818B	公开（公告）日	2016-06-01
申请公布号	CN104263818B	申请公布日	2016-06-01
分类号	C12Q1/68	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	王凯;高帆	申请（专利权）人	武汉希望云生物信息科技有限公司
代理机构	武汉河山金堂专利事务所（普通合伙）	代理人	胡清堂
地址	430014 湖北省武汉市东湖新技术开发区花城大道8号武汉软件新城2期C11栋19层01号
法律状态	-

摘要

本发明提供了基于高通量测序技术的全血免疫组库探测方法，该方法包括以下步骤：(1)全血样本中直接提取RNA(2)从RNA逆转录产生单链cDNA，将寡核苷酸接头序列连接到单链cDNA的3ˊ末端，采用通用引物和序列为GAC？CTC？GGG？TGG？GAA？CAC的特殊靶向引物P-VDJ为PCR反应的特殊引物对、连接寡核苷酸接头序列后的单链cDNA为PCR模板进行PCR反应，对免疫受体基因组进行扩增(3)高通量测序。该方法所用RNA直接从全血液样本中提取更适用于临床，使用单一的靶特异性引物，去均一地扩增亚型T细胞受体基因的可变区域，通过Illumina公司的Hi-SEQ？2500加条形码方式测序，确保了相对较低的成本,少于48小时的测序时间和良好的测序深度。