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一种藻红蛋白(PE)与Annexin V蛋白偶联方法

基本信息

申请号	CN202011149769.1	申请日	-
公开（公告）号	CN112745378A	公开（公告）日	2021-05-04
申请公布号	CN112745378A	申请公布日	2021-05-04
分类号	C07K14/47;C07K1/10;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/70	分类	有机化学〔2〕;
发明人	郭爱龙	申请（专利权）人	杭州联科生物技术股份有限公司
代理机构	上海精晟知识产权代理有限公司	代理人	周琼
地址	310000 浙江省杭州市拱墅区祥茂路36号B楼3楼A、B、C区
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种藻红蛋白(PE)与AnnexinV蛋白偶联方法，包括以下步骤：步骤1：AnnexinV蛋白表达纯化：1.1：基因序列优化：查找人AnnexinV蛋白的基因序列，将人AnnexinV基因序列优化，去除终止密码子序列，将其连入原核表达载体pET28a上，保留前后His标签蛋白，为蛋白纯化及后续偶联荧光素纯化做准备；1.2：AnnexinV蛋白诱导表达：挑取pET28a‑AnnexinV质粒单菌落，接种到10ml含有50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37℃200rpm振荡培养过夜，按照1：100将培养的菌液接种到含50μg/ml卡那霉素的LB液体培养基中，37℃200rpm振荡培养至菌液浓度OD₆₀₀为04‑0.6；本发明先通过分子筛纯化去除大部分游离的PE后再采用镍柱纯化浓缩，得到纯度较高的AnnexinV‑PE标记物，且保持蛋白良好的生物活性，可用于细胞凋亡检测。