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低起始量的DNA文库构建方法

基本信息

申请号	CN201910181240.9	申请日	-
公开（公告）号	CN109868270A	公开（公告）日	2019-06-11
申请公布号	CN109868270A	申请公布日	2019-06-11
分类号	C12N15/10（2006.01）I; C12Q1/6806（2018.01）I; C40B50/06（2006.01）I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	陈建国; 陈川; 杨传春; 张瑜巨; 庄丽雯	申请（专利权）人	深圳乐土生物科技有限公司
代理机构	深圳鼎合诚知识产权代理有限公司	代理人	孙银行;彭家恩
地址	518000 广东省深圳市大鹏新区葵涌街道生命科学产业园A11栋201
法律状态	-

摘要

一种低起始量的DNA文库构建方法，该方法包括：取基因组DNA加入标记有生物素的随机引物进行退火并进行扩增反应；分离纯化全基因组扩增产物；对分离纯化的产物进行末端补平得到线性平末端DNA；在补平的线性平末端DNA中加入连接酶进行连接反应；纯化获得双链环状DNA，然后将双链环状DNA打断成线性DNA片段；使用链霉素磁珠捕获标记有生物素的线性DNA片段；对捕获的线性DNA片段进行末端修复以及加A尾碱基反应；在加A尾碱基反应后的线性DNA片段两端连接接头；对连接接头的产物进行PCR扩增得到DNA文库。本方法利用生物素标记的随机引物对少量基因组DNA进行随机扩增，同时实现基因组DNA的放大、截短和生物素标记，从而实现低起始量投入的大片段DNA文库构建。