一种恶性疟原虫HRPII蛋白单克隆抗体的制备方法
基本信息
| 申请号 | CN200910142801.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN101659975A | 公开（公告）日 | 2010-03-03 |
| 申请公布号 | CN101659975A | 申请公布日 | 2010-03-03 |
| 分类号 | C12P21/08(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/06(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 余铭恩;冯俊涛;李晓照;吴琼杉;敖翔;余卫 | 申请（专利权）人 | 杭州新脉生物科技有限公司 |
| 代理机构 | 杭州中平专利事务所有限公司 | 代理人 | 杭州贤至生物科技有限公司 |
| 地址 | 311100浙江省杭州市余杭经济开发区振兴东路9号创业中心 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及一种恶性疟原虫HRPII蛋白单克隆抗体的制备方法，以恶性疟原虫HRPII蛋白为靶抗原，分析选择A、B两个优势抗原表位；分别将A、B两个优势抗原表位重复后通过连续四个甘氨酸连接，形成重组蛋白C；采用大肠杆菌最嗜密码子，将重组蛋白C氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列；化学合成上一步骤得到的核苷酸序列，并在其上下游分别添加酶切位点BamHI和EcoRI；将上一步合成得到的核苷酸片段插入表达载体PET-28a(+)，构建重组蛋白C表达载体，并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白C；超声破菌并低温离心后，取溶液上清通过镍琼脂糖亲和层析柱，洗脱得到纯化重组蛋白C；重组蛋白C多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾脏细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，多轮筛选得到6株杂交瘤细胞株；纯化单抗并分别标记辣根过氧化物酶(HRP)，ELISA正交实验配定最佳单抗配对组合。 |
