基于piggyBAC-Cas9系统构建基因敲除细胞株的方法
基本信息
| 申请号 | CN201811620283.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN109652458A | 公开（公告）日 | 2019-04-19 |
| 申请公布号 | CN109652458A | 申请公布日 | 2019-04-19 |
| 分类号 | C12N15/90（2006.01）I; C12N15/85（2006.01）I; C12N5/10（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 郑敦武; 段伟婷; 程冬洋 | 申请（专利权）人 | 太仓超云生物信息咨询服务有限公司 |
| 代理机构 | 苏州创元专利商标事务所有限公司 | 代理人 | 范晴 |
| 地址 | 215400 江苏省苏州市太仓市城厢镇人民南路162号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了基于piggyBAC‑Cas9系统构建基因敲除细胞株的方法，包括如下步骤：将Cas9/gRNA表达元件片段及抗性筛选片段构建在一个载体表达；将上述载体和piggyBAC表达质粒共电转染到目标细胞中，用含有对应抗性成分的培养基筛选被转染的细胞，挑单克隆进行培养；选前述的单克隆培养细胞进行PCR扩增，确认实际基因组序列；最后切除Cas9/gRNA表达元件。本发明的构件方法应用piggyBAC转作系统，在整合后还可以进行移除，实现无痕基因敲除。 |
