一种蛋白酶K高表达工程菌株的构建及应用
基本信息
| 申请号 | CN202110838854.7 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN113481225A | 公开（公告）日 | 2021-10-08 |
| 申请公布号 | CN113481225A | 申请公布日 | 2021-10-08 |
| 分类号 | C12N15/57（2006.01）I;C12N15/81（2006.01）I;C12N1/19（2006.01）I;C12R1/84（2006.01）N | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 罗漫杰;徐灿;王梁;施婧妮;宫安;柯旭峰 | 申请（专利权）人 | 武汉瀚海新酶生物科技有限公司 |
| 代理机构 | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人 | 仇钰莹 |
| 地址 | 430223湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号武汉国家生物产业（九峰创新）基地B5栋 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种蛋白酶K高表达工程菌株的构建及应用，属于基因工程及酶工程技术领域。本发明提供了一种新的编码蛋白酶K的基因，将该基因连接在pPICZαA表达载体上，构建蛋白酶K的单拷贝重组载体pPICZαA‑PRK，并基于同尾酶法，构建体外串联重复表达盒式结构多拷贝表达载体pPICZαA‑PRK‑nC；再通过酪蛋白透明圈法，筛选透明圈较大即潜在高表达量菌株，再通过摇瓶甲醇诱导表达筛选出表达量最高的菌株。相对于通过抗生素压力的筛选方法相比，本发明的构建方法和筛选方法不仅环保，而且能极大缩短筛选时间并节省人力成本。 |
