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一种高效重组表达限制性内切酶的方法

基本信息

申请号	CN201710035737.0	申请日	-
公开（公告）号	CN107058260A	公开（公告）日	2017-08-18
申请公布号	CN107058260A	申请公布日	2017-08-18
分类号	C12N9/22(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	高嵩;张坤晓;许恒皓;李肖;胡艳红;张颖;吴胜月	申请（专利权）人	莫纳（连云港）生物科技有限公司
代理机构	连云港润知专利代理事务所	代理人	淮海工学院;莫纳（连云港）生物科技有限公司
地址	222000 江苏省连云港市海州区通灌南路108号淮海工学院海洋药物研究院高嵩转
法律状态	-

摘要

一种高效重组表达限制性内切酶的方法，包括如下步骤：（1）先将限制性内切酶基因插入，再将载体转化导入大肠杆菌，筛选培养、测序，获得限制性内切酶的重组表达质粒，质粒载体为利用乳糖操纵子和T7启动子调控，IPTG诱导的pET系列表达载体；（2）将限制性内切酶的重组表达质粒转化至BL21（DE3）pLysS感受态细胞中，筛选获得限制性内切酶的重组表达菌株；（3）扩大培养限制性内切酶的重组表达菌株并诱导表达限制性内切酶。本发明方法利用葡萄糖对乳糖操纵子表达系统本底表达的抑制作用，以及BL21（DE3）pLysS菌株自身对乳糖操纵子表达系统本底表达的严苛控制作用，省略了对宿主DNA的甲基化保护步骤，不仅大大简化了重组表达过程，可以应用于多种限制酶的重组表达。