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一种无内毒素质粒大量制备工艺

基本信息

申请号	CN201810034434.1	申请日	-
公开（公告）号	CN108148831A	公开（公告）日	2018-06-12
申请公布号	CN108148831A	申请公布日	2018-06-12
分类号	C12N15/10	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	杨永坤;孟广荣	申请（专利权）人	南京驯鹿生物技术股份有限公司
代理机构	苏州中合知识产权代理事务所（普通合伙）	代理人	伍兵
地址	210061 江苏省南京市江北新区新锦湖路3-1号中丹科技园D栋10层
法律状态	-

摘要

本发明属于生物技术领域，具体公开了一种无内毒素质粒的大量提取技术，其特征是包括步骤菌种发酵、菌体细胞的收集、菌体的裂解、菌体裂解产物固液分离，收集液体部分和菌体裂解产物液体部分的纯化；纯化包括添加内毒素去除缓冲液，低温处理和电离层析去除杂质和其他质粒，收集目标质粒；所述内毒素去除缓冲液pH7.0，包含3‑(N‑吗啡啉)丙磺酸,氯化钠、聚乙二醇辛基苯基醚。该方法不使用动物源性的RNase A和蛋白酶K,以及对人体和动物有毒副作用的苯酚、氯仿；各项指标能达到或接近相关领域如美国食品和药品管理局(FDA)的质量标准；同时可以线性放大。为真核生物产品的工厂化生产和基因治疗产业的发展提供了重要的技术手段。