一种可用于胚胎注射制备敲除小鼠的Cas9蛋白的制备方法
基本信息
| 申请号 | CN201510269389.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN104962595B | 公开（公告）日 | 2018-11-27 |
| 申请公布号 | CN104962595B | 申请公布日 | 2018-11-27 |
| 分类号 | C12P21/02;C07K1/34;C07K1/22 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 黄军就;陈昱僖;松阳洲 | 申请（专利权）人 | 广州美格生物科技有限公司 |
| 代理机构 | 广州粤高专利商标代理有限公司 | 代理人 | 广州美格生物科技有限公司 |
| 地址 | 510000 广东省广州市国际生物岛螺旋四路1号办公区第二层210单元 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种可用于胚胎注射制备敲除小鼠的Cas9蛋白的制备方法，将Cas9蛋白序列转化入pET28a‑ccdB‑CmR载体，再转化至原核表达菌株，经过诱导表达后，收集菌体，经亲和纯化、用超滤管浓缩纯化、透析后即得到纯化的Cas9蛋白；所述pET‑28‑ccdB‑CmR载体是以原核表达载体pET28a基础，在Hind III和Xho I酶切位点之间插入NotI‑ccdB‑CmR‑AscI序列得到。本发明构建了高效的Cas9蛋白原核表达系统，表达得到的Cas9蛋白经体外切割实验证明具有体外活性，可特异切割体外DNA；胚胎注射实验证明纯化的Cas9蛋白具有体内活性，可用于制备基因修饰动物。 |
