海葵毒素新基因的克隆、表达及生物活性专利查询专利号|摘要-满商公司网

海葵毒素新基因的克隆、表达及生物活性

基本信息

申请号	CN01134565.9	申请日	-
公开（公告）号	CN1417333A	公开（公告）日	2003-05-14
申请公布号	CN1417333A	申请公布日	2003-05-14
分类号	C12N15/12;C12N15/63;C12N15/70;A61K35/56;A61P9/00	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	徐安龙;刘文华;彭文烈;卫剑文;彭立胜;陈琪	申请（专利权）人	中美奥达生物技术（北京）有限公司
代理机构	北京纪凯知识产权代理有限公司	代理人	龙淳
地址	100012北京市朝阳区亚运村惠忠北里312号天创世缘B2座1903室
法律状态	-

摘要

本发明通过构建侧花海葵(Anthopleura sp)触手cDNA文库和DNA测序，并根据海葵神经毒素蛋白的两端保守氨基酸序列，设计简并引物，用RT－PCR的方法，分离出1个新的海葵多肽神经毒素基因，命名为su。新基因长度为141bp，编码47个氨基酸的成熟肽(序列号码1)。所表达的蛋白质等电点为7.9，分子量约为4,800道尔顿。将su克隆于硫氧还蛋白基因融合表达载体pETTRX的trxA基因3’末端，构建符合读码框的融合基因，该融合蛋白在大肠杆菌中以胞内可溶的形式存在，表达量可达100～120mg/L。通过Ni－Chelating亲和色谱层析，蛋白酶3C切割和凝胶过滤，得到纯度在95％以上成熟的重组海葵神经毒素蛋白，得率为10～15mg/L。该蛋白对大鼠离体心脏具有强烈地促收缩作用。