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纤溶酶抑制剂rPI-T1的分离纯化方法

基本信息

申请号	CN201810282901.2	申请日	-
公开（公告）号	CN110343170B	公开（公告）日	2021-09-28
申请公布号	CN110343170B	申请公布日	2021-09-28
分类号	C07K14/81（2006.01）I;C12P21/02（2006.01）I;C07K1/18（2006.01）I;C07K1/14（2006.01）I;C12R1/84（2006.01）N	分类	有机化学〔2〕;
发明人	徐梅;杨宇;陈宏超;康乐;李娜;石乔;兰海英;石皎;李萍;王宏英;薛百忠	申请（专利权）人	远大生命科学（辽宁）有限公司
代理机构	北京泛华伟业知识产权代理有限公司	代理人	李渤;郭广迅
地址	110171辽宁省沈阳市浑南新区南屏东路18-1号
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种纤溶酶抑制剂rPI‑T1的分离纯化方法，其包括发酵分泌表达rPI‑T1的毕赤酵母，将包含rPI‑T1的发酵液的上清液经Capto‑MMC层析柱洗脱，收集得到包含rPI‑T1的洗脱液I；将获得的洗脱液I经Qhp层析柱洗脱，收集得到包含rPI‑T1的洗脱液II。该方法是一种毕赤酵母分泌表达蛋白rPI‑T1的简单、快速、稳定、高效的分离纯化方法。涉及以毕赤酵母菌无机盐培养基发酵高效表达目标蛋白rPI‑T1，并将发酵液上清经离心、微滤、层析等步骤进行纯化的方法。本方法纯化收率高，热原检测批间稳定合格，活性蛋白收率达到90％以上，C18HPLC分析纯度达到97％以上；具有对以重组毕赤酵母菌分泌表达蛋白的通用性，整体步骤少、效率高、收率高、工艺过程时间短、蛋白纯度高及易于产业化放大等显著特点。