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一种载脂蛋白-J的制备方法

基本信息

申请号	CN200710007353.4	申请日	-
公开（公告）号	CN101082045B	公开（公告）日	2010-12-08
申请公布号	CN101082045B	申请公布日	2010-12-08
分类号	C12N15/09(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	耿永健	申请（专利权）人	厦门德馨尚品医疗科技有限公司
代理机构	上海浦一知识产权代理有限公司	代理人	丁纪铁
地址	美国得克萨斯州
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种载脂蛋白-J的制备方法，其特征在于：a、采用RT-PCR技术从RNA克隆并扩增出载脂蛋白-J的全长或部分片段的互补脱氧核糖核酸cDNA；b、利用DNA重组技术将载脂蛋白-J cDNA全长或部分片段插入到一个质粒构成原核或真核细胞表达载体并连接6个组氨酸尾6HisTa；c、将此载脂蛋白-J原核表达质粒载体转染大肠杆菌，在抗菌素选择培养基中培养此转染的细菌以扩增载脂蛋白-J表达质粒；d、收集转染的菌体，离心沉淀，裂解释放载脂蛋白-J；e、将此载脂蛋白-J真核表达质粒载体转染哺乳动物细胞；f、用Ni-NTA树脂从细菌中抽提或细胞培养基上清含有连续6个组氨酸尾6HisTag的具有天然结构的可溶性重组载脂蛋白-J；g、用亲和层析方法纯化；h、对纯化载脂蛋白-J生物活性鉴定及检测。