一种基于CRISPR-Cas9技术的miR-126全长基因敲除试剂盒及其应用
基本信息
| 申请号 | CN201611002317.4 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN106566838B | 公开（公告）日 | 2019-11-01 |
| 申请公布号 | CN106566838B | 申请公布日 | 2019-11-01 |
| 分类号 | C12N15/63（2006.01）I; C12N15/113（2010.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 徐晓晶; 赵莹; 孙冰玉; 姚琴琴; 陆凌佳 | 申请（专利权）人 | 上海伯豪生物技术有限公司 |
| 代理机构 | 上海市汇业律师事务所 | 代理人 | 上海伯豪生物技术有限公司 |
| 地址 | 201203 上海市浦东新区张江高科技园区李冰路151号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9技术的miR‑126全长基因敲除试剂盒及其应用。本发明优选miR‑126基因上下游CRISPR‑Cas9靶标序列，设计合成针对该靶标序列的sgRNA单链，并构建到载体中，通过转染293T细胞株，sgRNA与trRNA构成特异识别结构，从而引导Cas9酶特异剪切miR‑126基因两端对应序列，持续药筛得到miR‑126全长基因敲除细胞株；经对药筛细胞株测序验证，得到优选的上下游sgRNA组合，该组合的敲除效率高达90％以上，以此构建试剂盒，可对293T、肺癌细胞系A549以及血管内皮细胞HUVEC系等多种类型细胞系进行特异性的miR‑126全长基因敲除。 |
