一种TTK酶活性的快速检测方法及其应用
基本信息
| 申请号 | CN201910486152.X | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN110129410A | 公开（公告）日 | 2019-08-16 |
| 申请公布号 | CN110129410A | 申请公布日 | 2019-08-16 |
| 分类号 | C12Q1/48 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 石榴;徐燕华 | 申请（专利权）人 | 武汉合研生物医药科技有限公司 |
| 代理机构 | 上海精晟知识产权代理有限公司 | 代理人 | 冯子玲 |
| 地址 | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区高新大道666号生物创新园B1栋二楼B274-12室 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明涉及一种TTK酶活性的快速检测方法及其应用，检测方法为：(1)取待测样品、空白对照、阳性对照分别与TTK酶、MBP蛋白/ATP混合液共孵育产生ADP；(2)向三组激酶反应体系中分别添加ADP‑GloTM反应试剂共孵育，终止激酶反应并消耗完剩余ATP；(3)向三组反应体系中分别添加激酶检测试剂共孵育，使ADP转化成ATP，读取新合成的ATP的发光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)‑RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)‑RLU(Blank))×100％计算TTK酶活。该方法基于ADP‑GloTM激酶实验，直接测定反应中消耗的ATP来定量反应进程。反应在384孔板中进行，不涉及反复吸出和洗板过程，操作误差小，同时增加了通量，适用于结合高通量移液工作站设备进行大量微孔板操作。该方法体系稳定，准确度高，可用于TTK靶点抑制剂和TTK靶点相关药物的筛选。 |
