哺乳动物细胞表达启动子及其制造和使用方法
基本信息
| 申请号 | CN201611139166.7 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN106754921A | 公开（公告）日 | 2017-05-31 |
| 申请公布号 | CN106754921A | 申请公布日 | 2017-05-31 |
| 分类号 | C12N15/113(2010.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/86(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 张春波;孙浩 | 申请（专利权）人 | 南京羚诺生物医药技术研究院有限公司 |
| 代理机构 | 北京科亿知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 孙浩;南京谋新生物技术有限公司 |
| 地址 | 211200 江苏省南京市鼓楼区五台花园9幢1003室 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种哺乳动物细胞表达启动子及其制造和使用方法，该方法包括以下步骤：步骤一，通过化学合成的方式合成引物；步骤二，通过PCR反应，获得启动子序列；步骤三，通过限制性酶切位点：BglII 和Kpn1，上述启动子序列插入包含有ori、卡纳抗性基因、sv40、sv40 polyA、多酶切位点序列的质粒骨架中，得到 pHep/L1质粒；步骤四，转染入E.Coli大肠杆菌进行质粒扩增，提取质粒，进行测序；步骤五，将新获得的质粒插入SEAP和IL10目的基因，通过CsCL密度梯度离心法提取纯净质粒。本发明提高现有质粒和AAV病毒的表达效率。 |
