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一种高效增殖、靶向杀伤肿瘤的CTL制备方法

基本信息

申请号	CN201410192581.3	申请日	-
公开（公告）号	CN103923880B	公开（公告）日	2016-03-30
申请公布号	CN103923880B	申请公布日	2016-03-30
分类号	C12N5/0783(2010.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	魏薇;赵西娟;魏丽婉;孟祥玲	申请（专利权）人	成都百赛泰科生物科技有限公司
代理机构	成都行之专利代理事务所（普通合伙）	代理人	成都百赛泰科生物科技有限公司;四川全组生命科技有限公司
地址	610000 四川省成都市武侯区人民南路三段17号附1号1栋14层1401号
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种高效增殖、靶向杀伤肿瘤的CTL制备方法。所述CTL制备方法，包括以下步骤：（a）免疫磁珠阴性分选去除CD4⁺CD25⁺Treg细胞；（b）将混合细胞置于装有无血清培养基中培养，获得悬浮细胞和贴壁细胞，（c）贴壁细胞中加入GM-CSF及IL-4，培养5天；第6天，加入肿瘤细胞全抗原，第7天加入TNF-α和IL-27；（d）将悬浮细胞移至经抗CD3单抗和重组人纤维连接蛋白包被的培养瓶中，加入IFN-γ，第2天加入IL-2、IL-12、IL-27，培养至第8天，得到CIK细胞；（e）将CIK细胞与成熟DC细胞混合，加入IL-12、IL-7、抗CD28单克隆抗体培养；第3天，加入抗CTLA-4单克隆抗体，再培养4天。本发明所述方法提高体外CTL细胞增殖的效率及其靶向杀伤肿瘤细胞的活性，抑制外周血单个核细胞向CD4⁺CD25⁺Treg细胞转化。