一种高通量水产养殖抗生素抗性基因的定量检测方法
基本信息
| 申请号 | CN202011445483.8 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN112501325A | 公开（公告）日 | 2021-03-16 |
| 申请公布号 | CN112501325A | 申请公布日 | 2021-03-16 |
| 分类号 | C12N15/63(2006.01)I;C12Q1/6806(2018.01)I;C12Q1/6851(2018.01)I;C12Q1/689(2018.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 那广水;张鸿;高会;李瑞婧;金帅辰;李西清;王璇;赵琨 | 申请（专利权）人 | 安徽微分基因科技有限公司 |
| 代理机构 | 安徽申策知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 程艳梅 |
| 地址 | 116085辽宁省大连市沙河口区凌河街42号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 一种高通量水产养殖抗生素抗性基因的定量检测方法，包括水产养殖样本的采集，处理、核酸抽提、标准品构建及标准曲线绘制、高通量qPCR检测和数据处理，四环素抗生素抗性基因包括tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetH、tetL、tetM、tetO、tetQ、tetS、tetW、tetX、tetBP等14种；14种标准品构建过程：(1)通过PCR反应扩增出耐药基因的DNA片段；(2)切胶回收耐药基因的普通PCR产物；(3)PCR产物一代测序，并与NCBI数据库比对，比对确定是相对应的基因再进行下一步；(4)将回收的普通PCR产物与克隆载体连接成环状质粒，转化至感受态细菌进行克隆，通过质粒携带的抗性基因筛选出阳性克隆子，分离纯化后提取质粒；(5)对质粒插入片段进行一带测序，跟(3)的序列进行比对，吻合即为该基因的质粒标准品。 |
