一种用于检测单个CAR-T细胞的慢病毒载体拷贝数的方法及其应用
基本信息
| 申请号 | CN202210406094.7 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN114686576A | 公开（公告）日 | 2022-07-01 |
| 申请公布号 | CN114686576A | 申请公布日 | 2022-07-01 |
| 分类号 | C12Q1/686（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 张同存;张琴星 | 申请（专利权）人 | 武汉科技大学 |
| 代理机构 | 武汉红观专利代理事务所（普通合伙） | 代理人 | - |
| 地址 | 430000湖北省武汉市和平大道947号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提出了一种用于检测单个CAR‑T细胞的慢病毒载体拷贝数的方法，包括如下步骤：S1，以β‑globin为内参基因，设计β‑globin的qPCR引物和探针，利用β‑globin的质粒模板建立标准曲线1；S2，设计目的基因的引物和探针，利用目的基因的质粒模板建立标准曲线2；S3，分别使用β‑globin和目的基因的qPCR引物对待测样本进行PCR扩增，从标准曲线1上计算出待测样本的β‑globin拷贝数，从标准曲线2上计算出待测样品的CAR拷贝数，然后根据公式计算出目的基因相对细胞数的拷贝数。本发明以β‑globin为内源参照基因，能够稳定且有效地检测出整合入CAR‑T细胞基因组中整合的病毒载体拷贝数，且能够换算成平均每个CAR‑T细胞基因组中整合的病毒载体拷贝数。 |
