一种多重巢式PCR方法

基本信息

申请号 CN202110504701.9 申请日 -
公开(公告)号 CN113186286A 公开(公告)日 2021-07-30
申请公布号 CN113186286A 申请公布日 2021-07-30
分类号 C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
发明人 钟晟;胡新蕾;严晓芹;闫子玥 申请(专利权)人 成都泰莱医学检验实验室有限公司
代理机构 深圳市优赛朝闻专利代理事务所(普通合伙) 代理人 谭育华
地址 610017 四川省成都市高新区天府大道北段1480号1栋A座5层21、23号
法律状态 -

摘要

摘要 一种多重巢式PCR方法,涉及基因标志物检测技术领域,本发明利用多重PCR和巢式PCR相结合,利用4种目的基因的基因标志物,设计全新的PCR引物,针对cfDNA5hmC富集捕获文库,使用touchdownPCR及热启动PCR方法进行多重巢式PCR扩增,避免PCR过程中引物二聚体、发夹结构的形成,保证了PCR扩增的特异性,进而完成靶序列的富集,得到二代测序靶向测序文库;通过对4个目的基因的羟甲基化状态的高效检测,实现在较低测序深度下完成对基因标志物中5hmC含量的检测,从而大幅降低测序成本,成为一种高效率、低成本的肝癌早期诊断检测手段。