一种具有多等位基因p53编码序列的重组腺病毒的制备方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种具有多等位基因p53编码序列的重组腺病毒的制备方法

基本信息

申请号	CN202010386150.6	申请日	-
公开（公告）号	CN111534546A	公开（公告）日	2020-08-14
申请公布号	CN111534546A	申请公布日	2020-08-14
分类号	C12N15/861(2006.01)I	分类	-
发明人	迪奥斯达·德鲍蒂斯塔;徐卫	申请（专利权）人	赛诺（深圳）生物医药研究有限公司
代理机构	深圳市卓科知识产权代理有限公司	代理人	赵辉丽;潘晓
地址	518000广东省深圳市南山区粤海街道高新技术产业园(中区)科技中一路19号赛百诺基因治疗园
法律状态	-

摘要

一种具有多等位基因p53编码序列的重组腺病毒的制备方法，包括有如下步骤：采用寡核苷酸的第一DNA接头修饰pUC18质粒，并将含有p53表达盒的片段克隆至修饰后质粒中，然后分别采用第二DNA接头及第三DNA接头修饰后得到的两种质粒进行匹配产生具有p53等位基因双拷贝的中间质粒，将中间质粒中的SpeI‑SalI片段导入至穿梭质粒中，获得p53等位基因双拷贝的穿梭质粒将穿梭质粒pSTL‑TDMp53(1+2)采用Pme1酶切使之线性化，然后和伙伴pAdEasy质粒一起通过电穿孔导入进宿主细菌，通过宿主细菌的细胞内进行同源重组，提取其含有p53编码序列等位基因双拷贝的表达盒和腺病毒骨架的质粒，然后通过电穿孔手段导入HEK‑293细胞，产生具有p53编码序列等位基因双拷贝的重组腺病毒。