一种降钙素原突变体蛋白的原核重组表达及纯化方法专利查询专利号|摘要-满商公司网

一种降钙素原突变体蛋白的原核重组表达及纯化方法

基本信息

申请号	CN202010336642.4	申请日	-
公开（公告）号	CN111996195A	公开（公告）日	2020-11-27
申请公布号	CN111996195A	申请公布日	2020-11-27
分类号	C12N15/16(2006.01)I	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	霍栋栋;刘淑香;杨文魁;焦虎平;曾丽亚;夏志平;游可为;陈浩源	申请（专利权）人	润方（长春）生物科技有限公司
代理机构	长春吉大专利代理有限责任公司	代理人	张岩
地址	130000吉林省长春市市辖区高新技术产业开发区超越大街与创意路交汇处汉森香榭里27号楼102室
法律状态	-

摘要

本发明涉及一种降钙素原突变体蛋白的原核重组表达及纯化方法，包括重组降钙素原蛋白的基因克隆，重组PCT表达载体的构建，重组PCT表达菌的构建，重组PCT表达菌的诱导表达，以及重组PCT的分离纯化。通过分析PCT蛋白结构，对天然PCT蛋白序列进行了改造，对易降解位点进行了序列替换(利用‑Ala58‑Ala59‑和‑Ala92‑Ala93‑Ala94‑Ala95‑替换了‑Lys58‑Arg59‑和‑Gly92‑Lys93‑Lys94‑Arg95‑)，制备具有天然免疫原性的高纯度重组PCT蛋白，提高了PCT蛋白的稳定性，同时保持了原有的免疫原性；利用基因合成技术替代了原有的PCR技术制备目的基因，提高了基因操作的准确性和工作效率，缩短了表达菌构建的实验周期；设计了完整的蛋白表达纯化体系，得到的突变体蛋白可以作为标准抗原用于制备单克隆抗体，或作为标准品用于PCT的免疫学检测。