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一种重组人角质细胞生长因子生物学活性检测方法

基本信息

申请号	CN201610633571.8	申请日	-
公开（公告）号	CN106226511B	公开（公告）日	2018-04-06
申请公布号	CN106226511B	申请公布日	2018-04-06
分类号	G01N33/53	分类	测量；测试;
发明人	高婧;罗双儒;代亚东;覃安友;黎耘;张宝华;李晓鹏;李月华	申请（专利权）人	信立泰（苏州）药业有限公司
代理机构	深圳市科吉华烽知识产权事务所（普通合伙）	代理人	胡吉科
地址	215421 江苏省苏州市太仓市沙溪镇梦溪路1号
法律状态	-

摘要

本发明提供了一种重组人角质细胞生长因子(rhKGF‑1)检测方法，它包括以下步骤：1)细胞培养；2)细胞接种，控制细胞密度；3)rhKGF‑1样品经处理后，进行浓度梯度稀释，并在各rhKGF‑1浓度稀释度中加入5‑乙炔基‑2"‑脱氧尿苷(EdU)，以制备含有一系列rhKGF‑1浓度稀释度的上样样品；4)对步骤2)所述的细胞板中的细胞进行洗涤，去除培养基；5)将步骤3)所述的上样样品上样于步骤4)中所述的细胞培养板中，培养孵育细胞；6)将步骤5)所述的细胞进行固化和透化处理后，EdU进行“Click‑iT”反应；7)将步骤6)中经过处理后的细胞放置于多功能酶标仪中读取荧光强度(RFU)，计算rhKGF‑1生物学活性。本发明所使用的方法具有检测背景低、灵敏度高、专属性强、准确度高、重复性好等优点，尤其适用于rhKGF‑1生物学活性的检测及质量标准的建立。