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一种溶瘤腺病毒的构建方法

基本信息

申请号	CN201911097478.X	申请日	-
公开（公告）号	CN110747228A	公开（公告）日	2020-02-04
申请公布号	CN110747228A	申请公布日	2020-02-04
分类号	C12N15/85;C12N7/01;A61P35/00;C12R1/93	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	刘骏;徐金凤;金丽;周春艳;谢伟建	申请（专利权）人	复百澳（苏州）生物科技有限公司
代理机构	苏州周智专利代理事务所（特殊普通合伙）	代理人	周雅卿
地址	215024 江苏省苏州市工业园区若水路398号D栋
法律状态	-

摘要

本发明公开了一种溶瘤腺病毒的构建方法，包括以下步骤：步骤一：在NCBI数据库中调取Human mastadenovirus C全基因组序列信息和Tert‑p启动子序列，根据Tert‑p、E1A、E1B及的E1A和E1B之间的链接区域(FBLink)序列信息，在通用生物系统(安徽)有限公司进行化学合成至PUC57载体，得到PUC57‑Tert‑E1A‑FBLink‑E1B质粒；步骤二：设计引物对PUC57‑Tert‑E1A‑FBLink‑E1B质粒进行扩增；步骤三：腺病毒载体经SacII酶切；步骤四：同源重组法构建FV012‑Tert‑E1A‑FBLink‑E1B溶瘤腺病毒载体；步骤五：将步骤四得到的载体和腺病毒骨架质粒PBHG转染到细胞中进行病毒包装，待细胞出现病变后，得到目的溶瘤腺病毒。本发明获得的溶瘤腺病毒的复制能力和杀肿瘤细胞的能力要强于TERT‑E1A‑IRES‑E1B结构的溶瘤腺病毒。