一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法
基本信息
| 申请号 | CN202011629470.6 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN112680477A | 公开（公告）日 | 2021-04-20 |
| 申请公布号 | CN112680477A | 申请公布日 | 2021-04-20 |
| 分类号 | C12N7/00(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 陈瑞爱;黄梅;张古月;温良海 | 申请（专利权）人 | 华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司 |
| 代理机构 | 广州市科丰知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 龚元元 |
| 地址 | 526238广东省肇庆市高新区创业路5号肇庆大华农生物药品有限公司动物大楼（生产车间）一楼 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明属于生物领域，公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步骤：步骤1：提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA，并根据RNA获得病毒的cDNA；步骤2：以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物；步骤3：将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段；步骤4：将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒；步骤5：将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞，得到重组的H9N2病毒；其中，8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。该方法的优势在于：操作简单、重组精确、拯救效率高。 |
