一种包含表达功能性重组人凝血因子Ⅶ载体的宿主细胞及其高水平表达方法
基本信息
| 申请号 | CN201410470196.0 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN104293737B | 公开（公告）日 | 2017-06-13 |
| 申请公布号 | CN104293737B | 申请公布日 | 2017-06-13 |
| 分类号 | C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N9/64(2006.01)I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 张全爱;赵邑;张禄卿;郑耀武;何永吉;潘薇薇;赵峰梅;梁雅丽;曹鹏程;赵亚蕊 | 申请（专利权）人 | 太原博奥特生物技术有限公司 |
| 代理机构 | 太原晋科知识产权代理事务所（特殊普通合伙） | 代理人 | 太原博奥特生物技术有限公司 |
| 地址 | 030006 山西省太原市小店区师范街50号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 一种包含表达功能性重组人凝血因子Ⅶ载体的宿主细胞及其高水平表达方法，目的是构建含FⅦ、GGCX及VKORC1重组核酸的表达载体，利用GGCX及VKORC1的协同表达提高重组FⅦ的g‑羧基化修饰；本发明宿主细胞包含编码维生素K依赖的人凝血因子Ⅶ（FⅦ）重组核酸、小鼠维生素K还原酶复合体亚基1（VKORC1）重组核酸和小鼠g氨基酸羧化酶（GGCX）重组核酸，以及绝缘子insulator（4X）重组核酸；高水平表达功能性人凝血因子Ⅶ的方法包括构建一种表达载体，利用脂质体法将该表达载体介导进入DHFR缺陷型CHO动物细胞内，DMEM培养基筛选阳性克隆；无血清驯化培养该宿主细胞株；利用镍离子亲和层析纯化hFⅦ重组蛋白，SDS‑PAGE及Western blot检测；凝血酶原时间(PT)测定FⅦ重组蛋白促凝血活性。 |
