构建细胞全转录本扩增产物的方法及其应用
基本信息
| 申请号 | CN201711475632.3 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN109988825A | 公开（公告）日 | 2019-07-09 |
| 申请公布号 | CN109988825A | 申请公布日 | 2019-07-09 |
| 分类号 | C12Q1/6851（2018.01）I; G01N33/574（2006.01）I; G01N33/569（2006.01）I | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 郭琦; 王秀莉; 董超; 李长平; 卢孟孟; 宋廷瑞 | 申请（专利权）人 | 杭州莲和医学检验所有限公司 |
| 代理机构 | 北京清亦华知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 杭州莲和医学检验所有限公司 |
| 地址 | 310000 浙江省杭州市滨江区长河街道滨安路688号5幢五层501室 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明提出了一种构建细胞全转录本扩增产物的方法。该方法包括：将细胞样品进行磁珠捕获处理，以便获得待处理细胞；以及将所述待处理细胞进行单细胞全转录本扩增，以便获得所述待处理细胞的全转录本扩增产物，其中，进行单细胞全转录本扩增之前，进一步包括将所述待处理细胞进行裂解处理，所述裂解处理是通过向所述待处理细胞中加入PBS和裂解液进行的，基于1～100个待处理细胞，所述PBS的用量为7微升，所述裂解液的用量为4微升，所述裂解液包括100mM Tris‑HCl、500mM KCl、25mM MgCl2、10％NP40、0.1M DTT、RNA酶抑制剂(40U/μl)、0.5μM UP1引物、2.5mM dNTP以及无核酸酶水。该方法将磁珠捕获技术与单细胞全转录本扩增技术巧妙相结合，严格控制待处理细胞与裂解液和PBS的加入量，可稳定获得微量细胞(如循环肿瘤细胞)全转录本扩增产物。 |
