一种适应全悬浮培养的羊睾丸永生化细胞驯化方法
基本信息
| 申请号 | CN201811205098.9 | 申请日 | - |
| 公开（公告）号 | CN111057675A | 公开（公告）日 | 2020-04-24 |
| 申请公布号 | CN111057675A | 申请公布日 | 2020-04-24 |
| 分类号 | C12N5/071;C12N1/36 | 分类 | 生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程; |
| 发明人 | 杨朋欣;丁国杰;冯育宁;周建华;薛晓娟;郑玉芳;汉武娇;李媛妹;池贤凤;侯丹丹 | 申请（专利权）人 | 安徽东方帝维生物制品股份有限公司 |
| 代理机构 | 北京思元知识产权代理事务所（普通合伙） | 代理人 | 余光军;张瑞雪 |
| 地址 | 236800 安徽省亳州市经济开发区亳菊路889号 | ||
| 法律状态 | - | ||
摘要
| 摘要 | 本发明公开了一种适应全悬浮培养的羊睾丸永生化细胞驯化方法，包括：(1)将未驯化的羊睾丸细胞水浴复苏后离心；(2)用含5％新生牛血清的DMEM培养液重悬细胞后接种于细胞培养瓶内培养；(3)传代培养，消化；(4)回旋悬浮培养；(5)转入悬浮培养瓶中培养直至细胞大团消失，重复培养时细胞密度能够稳定，获得适应全悬浮的羊睾丸永生化细胞。在悬浮培养条件下，本发明驯化培养的代细胞形态为圆球形、透亮，呈单个或小团状悬浮状；经过10代的悬浮驯化细胞可稳定在96h培养至2～3×106细胞/ml；病毒培养适应性显示，所驯化的悬浮细胞接种羊口疮病毒72h后，病毒滴度达到峰值，与贴壁培养的细胞产毒水平相似。 |
