基因敲除方法

基本信息

申请号 CN201710672040.4 申请日 -
公开(公告)号 CN109385421A 公开(公告)日 2019-02-26
申请公布号 CN109385421A 申请公布日 2019-02-26
分类号 C12N15/113(2010.01)I; C12N15/90(2006.01)I 分类 生物化学;啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物学;酶学;突变或遗传工程;
发明人 魏文胜; 陈一欧; 周悦欣; 张鸿敏; 袁鹏飞; 刘源 申请(专利权)人 博雅缉因(北京)生物科技有限公司
代理机构 北京知元同创知识产权代理事务所(普通合伙) 代理人 北京大学; 博雅缉因(北京)生物科技有限公司
地址 100871 北京市海淀区颐和园路5号北京大学
法律状态 -

摘要

摘要 本发明涉及通用供体构建体,以及基因敲除方法及其系统和试剂盒。本发明的基因敲除方法通过非同源末端连接将通用供体构建体中包含的标记物基因插入到细胞基因组中的双链断裂位置上,通过表达的标记物富集基因被敲除的细胞,提高了通过序列特异性核酸酶产生基因敲除的效率。本发明的通用供体构建体包含通用线性供体DNA,所述通用线性供体DNA上包含可以被序列特异性核酸酶切割的通用靶序列,该通用靶序列在待进行基因敲除的细胞的基因组中不存在,因此,在进行基因敲除时,无需专门构建配套使用的线性供体DNA,直接使用通用线性供体DNA和靶向该通用线性供体DNA的gRNA即可。