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在食气梭菌基因组上快速整合大片段DNA的方法

基本信息

申请号	CN201811174829.8	申请日	-
公开（公告）号	CN111019873A	公开（公告）日	2020-04-17
申请公布号	CN111019873A	申请公布日	2020-04-17
分类号	C12N1/21;C12N15/113;C12N15/90;C12R1/145	分类	生物化学；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物学；酶学；突变或遗传工程;
发明人	黄鹤;柴常升;姜卫红;顾阳	申请（专利权）人	安徽吐露港生物科技有限公司
代理机构	上海一平知识产权代理有限公司	代理人	安徽吐露港生物科技有限公司
地址	239000 安徽省滁州市世纪大道801号（邵阳工业园）8二层东北侧
法律状态	-

摘要

本发明提供了一种在食气梭菌基因组上快速整合大片段DNA的方法。具体地，本发明包括步骤：(i)提供一待整合的宿主细胞，所述的宿主细胞的基因组中在待整合的位点处含有外源的attB序列；(ii)将含外源基因的整合构建物引入所述宿主细胞，从而在所述宿主细胞的基因组的待整合位点进行定位重组，从而获得经整合处理的宿主细胞；其中，所述的整合构建物为环状结构，并且包括：ФCD27整合酶的表达盒、ФC31整合酶的表达盒、外源基因的表达盒、ФCD27的attP序列和ФC31的attP序列，其中，ФCD27的attP序列和ФC31的attP序列分别位于外源基因的两侧。本发明方法可以高效、稳定地将大片段DNA整合入杆菌的基因组上。